懸浮細(xì)胞免疫熒光的挑戰(zhàn)

免疫熒光(IF)技術(shù)基于抗原-抗體反應(yīng)的原理，利用熒光標(biāo)記抗體檢測和定位細(xì)胞或組織中的特定抗原。細(xì)胞免疫熒光(IF-IC)以細(xì)胞為樣本、細(xì)胞需牢固地生長/附著在玻片上，防止細(xì)胞在后續(xù)清洗、固定、破膜和染色時丟失。貼壁細(xì)胞能粘附生長在包被玻片上，滿足IF-IC所需結(jié)合力；但懸浮細(xì)胞不具備粘附固體表面能力，傳統(tǒng)離心甩片或涂片法制備的細(xì)胞片存在細(xì)胞分布不均、固定不牢導(dǎo)致后續(xù)細(xì)胞丟失的問題，影響后續(xù)染色和顯微觀察。靶點(diǎn)科技懸浮細(xì)胞免疫熒光專用玻片，作為這一痛點(diǎn)的解決方案，可以像貼壁細(xì)胞一樣處理懸浮細(xì)胞。

Shi-fix^™玻片

解決懸浮細(xì)胞免疫熒光中的難題

懸浮細(xì)胞免疫熒光專用Shi-fix^™玻片，可牢固地吸附懸浮細(xì)胞、后續(xù)可像“貼壁細(xì)胞"一樣完成IF-IC，在獲得更好結(jié)果的同時，能顯著簡化實(shí)驗(yàn)流程、提高實(shí)驗(yàn)效率，同時還節(jié)省經(jīng)費(fèi)。

Shi-fix^™plus玻片

滿足低細(xì)胞量的懸浮細(xì)胞免疫熒光需求

在實(shí)際應(yīng)用中，或許會遇到細(xì)胞數(shù)量少的特殊樣本，運(yùn)用Shi-fix™玻片可能達(dá)不到理想的IF-IC效果。為此Shikhar Biotech在Shi-fix™玻片基礎(chǔ)上升級出增強(qiáng)型Shi-fix™ plus玻片(具有更強(qiáng)的懸浮細(xì)胞吸附性)，解決低數(shù)量懸浮細(xì)胞樣本的IF-IC煩惱！同時，plus適合培養(yǎng)，為刺激實(shí)驗(yàn)提供了選擇。

使用Shi-fix™玻片發(fā)表的文獻(xiàn)有哪些？用Shi-fix™玻片做了哪些實(shí)驗(yàn)？

1.在Google Patents的Method of treatment上發(fā)表的Therapeutic and prophylactic applications of cell penetrating, anti-DNA binding proteins, in particular in the context of inflammatory disease and complications (International Patent WO2023034778A1)中，涉及細(xì)胞穿透性抗DNA結(jié)合蛋白的治療和預(yù)防應(yīng)用，特別是在炎癥性疾病及其并發(fā)癥方面的應(yīng)用，申請者使用Shi-fix™玻片培養(yǎng)PLB-985細(xì)胞使其貼壁，進(jìn)行堿性磷酸酶和DAPI染色。

3.Portelinha等人報(bào)告了一種Polo-like激酶4與BCL-2抑制劑的治療組合，它能引發(fā)侵襲性淋巴瘤的基因組不穩(wěn)定性和細(xì)胞死亡。

其中，作者先用Shi-fix^™玻片吸附OCI-Ly19細(xì)胞，然后免疫熒光染色，驗(yàn)證不同劑量CFI對細(xì)胞中心體數(shù)量的影響。細(xì)胞核(DAPI，藍(lán)色)、pericentrin(紅色)、CEP110(綠色)。

作者后續(xù)又用Shi-fix^™玻片吸附HBL-1細(xì)胞，免疫熒光染色驗(yàn)證CFI或Ven及聯(lián)合對細(xì)胞中心體的影響。細(xì)胞核(DAPI，藍(lán)色)、pericentrin(紅色)。

4.Chen等人評估干擾DDR的核穿透性抗DNA自身抗體對活化的人粒細(xì)胞樣分化PLB-985細(xì)胞和從C57BL/6小鼠中分離出來的中性粒細(xì)胞解聚、釋放DNA和NETs的影響。

作者用Shi-fix^™玻片吸附PLB-985細(xì)胞驗(yàn)證DX1的穿透性(AP酶顯色系統(tǒng))。

后續(xù)用DAPI(藍(lán)色)和SYTOX Green(綠色)染色吸附于Shi-fix^™玻片上的PLB-985細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)DX1可抑制PMA刺激分化PLB-985細(xì)胞的染色質(zhì)解聚和DNA釋放。

5.Yao等人研究證實(shí)人胃癌組織中NK細(xì)胞水平與CAFs數(shù)量成反比，CAFs通過誘導(dǎo)鐵死亡(鐵依賴性脂質(zhì)過氧化物積累)損害NK的抗腫瘤能力。CAFs通過促進(jìn)鐵超載誘導(dǎo)NK鐵死亡，細(xì)胞內(nèi)鐵水平降低則能保護(hù)NK免受CAFs誘導(dǎo)鐵死亡的影響。

作者在研究中借助Shi-fix^™玻片對正常pb-NK(外周血NK)和共孵育CAFs的pb-NK染色FerroOrange，判斷細(xì)胞中“鐵池"中鐵含量。

6.研究人員將Phe和CHex修飾樹枝狀聚合物用于T細(xì)胞的pH敏感藥物遞送系統(tǒng)。樹枝狀聚合物通過內(nèi)吞被內(nèi)化到T細(xì)胞中，在弱酸(pH 6.5)下，細(xì)胞對其攝取能力增強(qiáng)。研究證實(shí)Phe和CHex修飾樹枝狀聚合物具有向T細(xì)胞及其亞群遞送的潛能，可用于腫瘤免疫療法。

研究者借助Shi-fix^™玻片完成對Jurkat細(xì)胞的免疫熒光染色，證實(shí)PAMAM-Phe-CHex和 PAMAM-CHex-Phe與CD3-PE染色T細(xì)胞相關(guān)。細(xì)胞核(DAPI，藍(lán)色)、Phe/CHex修飾樹枝狀聚合物(FITC，綠色)、溶酶體(紅色)。

7.在2021年巴塞羅那大學(xué)醫(yī)學(xué)院發(fā)布的Genetic Disruption of Transfer RNA Modifications in Human Cancer的博士論文中，為使細(xì)胞吸附更加牢固，作者借助Shi-fix^™玻片完成NCI-H82、DMS-273和HCC-33細(xì)胞的免疫熒光染色。

8.Whiteaker等人開發(fā)的51重檢測方法(DDR-2)，可量化蛋白質(zhì)表達(dá)和DNA損傷反應(yīng)磷酸化。該方法可對永生化淋巴母細(xì)胞系和原代人類外周血單核細(xì)胞中電離輻射誘導(dǎo)的DNA損傷后的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行量化，鑒定抑制ATM的PD生物標(biāo)記物，為臨床前和臨床研究提供支持。

研究者借助Shi-fix^™ coated 96-well microplate先后多次對LCL57細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色。

9.Kandil等人開發(fā)出新型升級版siRNA運(yùn)送系統(tǒng)(Tf-PEI多聚物)，它不僅能通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用將有效載荷特異性運(yùn)送至所需的靶細(xì)胞，還能增強(qiáng)從內(nèi)泌體囊泡中的釋放，從而在細(xì)胞質(zhì)中啟動RNAi。

作者在驗(yàn)證Jurkat細(xì)胞中siRNA溶酶體釋放染色時，用Shi-fix^™玻片來固定吸附Jurkat細(xì)胞。AF488-siRNA(綠色)、溶酶體(紅色)、細(xì)胞核(DAPI，藍(lán)色)。

10.論文報(bào)道一種合成的標(biāo)記熒光生長抑素類似物——67/68Ga-MMC(IR800)-TOC，在體內(nèi)和體外的宏觀、中觀和微觀尺度上都觀察到了受體介導(dǎo)的吸收。胰腺NET患者的手術(shù)生物樣本也顯示出受體特異性的藥劑結(jié)合，可清晰地劃分出與病理結(jié)果相匹配的腫瘤邊界。

在驗(yàn)證細(xì)胞對Ga-MMC(IR800)-TOC的結(jié)合和內(nèi)化實(shí)驗(yàn)中，作者先用Shi-fix^™玻片分別吸附HCT116-SSTR2、NCI-H69和HCT116-WT細(xì)胞，與5 µM Ga-MMC(IR800)-TOC(紅色)孵育1小時后染色細(xì)胞核(綠色)，最后用共聚焦顯微鏡圖像。

使用Shi-fix™玻片部分驗(yàn)證細(xì)胞結(jié)果展示圖

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